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高中生物学课本在:染色质(体)容易被碱性染料染成深色。实验中对染色质(体)进行染色,须使用龙胆紫溶液或醋酸洋红溶液等碱性染色剂,这些染色剂是以龙胆紫或洋红溶解于醋酸溶液中制得,配制后的龙胆紫溶液pH值约小于7(呈酸性)。那么为什么把龙胆紫溶液称为碱性染色剂呢?
一、碱性染料对染色体染色的原理
细胞核中的染色质(体)内含有脱氧核糖核酸(即DNA),属酸性物质,可电离出H,而使自身带负电荷,所以它能与碱性染料(如龙胆紫)电离出的带正电荷的助色基团通过电荷间的引力作用牢固结合,从而被染料染上颜色。在“植物细胞有丝分裂的观察”实验中,若用盐酸解离后不漂洗直接染色,则由于盐酸是一种强酸,而脱氧核糖核酸是一种弱酸,盐酸的存在会抑制脱氧核糖核酸的电离,从而使脱氧核糖核酸无法与龙胆紫中带正电荷的助色基团结合,这样染色质就无法被染上颜色。
二、碱性染料和酸性染料
1、作为染色剂必须具备两个条件:
一是具有颜色;产生颜色的部分称为发色基团
染料的颜色和它与组织间的亲和力是由染料本身的分子结构决定的。分子结构的某些基团吸收某种波长的光,而不吸收另外波长的光,从而使人觉得好像这一物质“发出颜色”似的,因此把这些基团称为“发色基团”。
二是要与被染组织间有亲和力,与组织间产生亲和力的部分称为助色基团
助色基团的存在使染料物质离子化,极性增强,促进染料与组织间发生作用,产生染色效果。
例如:碱性染料龙胆紫结构式如图所示,其中由三苯甲烷构成发色基团,由(一N(CH3)2)构成助色基团。(一N(CH3)2)是极性基团,,可与H结合而带正电使染料分子能够与带负电的物质结合,从而使其染上颜色。在配制,酸性条件下H多,可促进龙胆紫的电离极化。
2、碱性(或酸性)染色剂的界定并非由染料溶液的pH值决定的,而是根据染料物质中助色基团电离后所带的电荷来决定的。
助色基团带正电荷的染色剂为碱性染色剂(又称阳离子染料)。
助色基团带负电荷的染色剂为酸性染色剂(又称阴离子染料)。
3、高中阶段涉及的碱性染料主要有两种:龙胆紫、醋酸洋红,其染料本身的PH值呈酸性。
从配制方法上看。龙胆紫染液的配制过程:取龙胆紫溶解在2%乙酸溶液,直到溶液不变成深紫色为止;醋酸洋红的配制过程:取100mlA5%乙酸,煮沸30s,加入1g洋红,搅拌,再煮2~这两种碱性染料的配制过程中用到的溶剂都是乙酸。
龙胆紫PH值:3.0-5.0醋酸洋红PH值:1.9
三、其他碱性染料
生物学常见的碱性染料有:龙胆紫、醋酸洋红、苏木精、甲基绿、吡罗红等等
高中实验《观察细胞内DNA和RNA的分布》,利用甲基绿和吡罗红的混合染色剂对细胞进行染色,甲基绿将DNA染成绿色而吡罗红将RNA染成红色,以观察DNA和RNA在细胞内的分布情况。
四、苏木精-伊红染色法(简称HE染色法)
苏木精为碱性染料,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色。
伊红为酸性染料,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色
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